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(1)接通电源
接通计算机和 WAVE 系统的各个部件。 WAVE 系统的通电顺序是:
Interface (数据控制交换界面),
Pump( 泵 ) ,
Chiller( 样品冷却器 ) ,
Autosampler( 自动进样器 ) ,
Oven( 柱箱 ) ,
Detector( 紫外检测器 ) 。
这时仪器在正常状态下,除了柱箱的显示面板显示“ E5 ”外,其它的显示面板显示“ D-Line Not ready ”。
(2) 系统初始化
打开“ Navigator operatio ” 界面,点击“ Initialize ”钮,等到五个部件显示“ OK ”后,点击“ OK ”钮。
(3) 设置柱箱温度
按柱箱面板上的“ Set/Monit ”键,然后按上下箭头键设置到所需的温度 , 要求在开泵之前,温度达到 40 ℃ ,但我们一般设置在 50 ℃ 以上,推荐设置为第一个样品检测温度。
(4) 溶液除气泡
每次更换新的溶液后,卸下除气器左侧输出口的管道,接上注射器抽出至少 10ml 溶液,然后再接上管道,每次新换溶液后,都要对相应的管道进行这样的操作。
(5)高压泵除气泡
高压泵应每天除气泡。打开泵面板上的小门,依次先将泵阀向右旋转打开,然后按“ PUMP ON/OFF ”键,最后按“ PURGE ”键。这时液体的流速显示“ 9.999ml/min ”,溶液直接流向废液瓶。一般排气三分钟,如果还见到小气泡,延长排气时间。然后以相反的顺序依次关闭“ PURGE ”,“ PUMP ON/OFF ”,泵阀。
(6) 冲洗进样器
按自动进样器面板上的“ WASH ”键,冲洗进样器以排除气泡,重复 2~3 次。
(7) 冲洗加速器
按自动进样器右侧的冲洗加速器按钮 30~90 秒,直至废液排出管中可见小气泡。
(8) 系统平衡
按高压泵面板上的“ MANUAL SET ”键,并且设置“ 50% ”溶液 B ,按“ ENTER ”键二次使溶液 C 和溶液 D 为“ 0% ”。将液体流速项设置“ 0.7ml/min ”,然后按按“ ENTER ”键直至面板显示常规状态。当柱箱达到设置温度后,按“ PUMP ON/OFF ”键,平衡柱子至少 10 分钟。然后依照相同的步骤调节流速到“ 0.9ml/min ”。注意检测系统压力和废液瓶中的废液。
(9) 编写样品表和加样
打开 D-7000 HSM Administration 界面,点击“ Application setup ”钮,弹出“ Application manager ”窗口,选择合适的驱动器“ Drive ”和目录“ Directory ”,然后在“ New Application ”栏中键入新的项目名,点击“ Create ”钮和“ OK ”钮后,关闭 D-7000 HSM Administration 界面。
打开 WAVEMAKER ,在 WAVE 操作系统中,编制样品表“ Sample Table ” , 根据样品表将样品放进相应的样品架上。
(10) 启动样品检测程序
检测文件当前目录是否正确,存储编辑好的“ Sample Table ”到制定的目录中,按“ Run Sample ”钮,在计算机控制下自动开始样品检测。
WAVE 系统维护规程
(1) 柱子反向高温清洗步骤
由于样品中常常含有各种各样的杂质,随着分析样品数的增加,这些杂质会附着在柱子上,使柱子分辨率逐渐下降,这时需要按下面的程序对柱子进行清洗:
(2) 卸下 DNASep 柱,用连接器取代,设置泵为 50% 溶液 A , 50% 溶液 B ,流速 0.9ml/min ,这时系统的压力应超过 400psi 。
(3) 设置柱箱温度到 75 ℃ 。
(4) 将 DNASep 柱反向重新接到系统上。
(5) 设置 100% 溶液 D ,流速 0.9ml/min ,洗柱 30 min 。
(6) 设置柱箱温度到 56 ℃ , 泵为 50% 溶液 A , 50% 溶液 B ,流速 0.9ml/min 。
(7) 将 DNASep 柱正向重新接到系统上。
(8) 平衡柱子 1~2 小时。
(9) 用 WAVE 的低范围标样检测柱子的分辨率。
一般柱子每分析 100 次,冲洗柱子一次( 75 ℃ 用 D 液冲洗 30 分钟, 再平衡 30 分钟) ;柱子每分析 1000 次,反向冲洗一次。
(10) 柱子的储存
如果超过 3 个工作日仪器不使用,需要卸下 DNASep 柱来储存。
1、 用 100% 溶液 D ,流速 0.9ml/min ,洗柱至少 15 min 。
2、 卸下 DNASep 柱。
3、 用螺帽将柱子两端密封,室温储存。
4、 用连接器接到系统上。
5、 系统的异丙醇冲洗
WAVE 系统的异丙醇冲洗
6、 系统每 3 个月用异丙醇冲洗一次。
7、 异丙醇冲洗液: 50% 的异丙醇水溶液,异丙醇和水等体积混合。
8、 卸下柱子,换上连接器。
9、 将所有管线放到异丙醇冲洗液中。
10、 以 0.5 ml/min 流速, A, B 和 D 各 33% ,冲洗 30min 。
11、 在步骤 5 工作时,按 WASH 钮 15-20 次冲洗注射器。
12、 步骤 5 完成后,将所有管线放到水中。
13、 用注射器从排气口抽取至少 5 管溶液,以保证异丙醇冲洗液全排出。
14、 以 A, B 和 D 各 33% 的比例 PURGE 3-5 min 。
15、 重复步骤 5 , 6 。
16、 将所有管线放到各自的洗液中。
17、 重复步骤 8 , 9 , 5 , 6 。但步骤 5 延长到 60min 。
重新接上柱子。
18、 预柱的更换
当预柱的压力上升较高后(一般大于 2000pps )更换预柱。
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