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P2 实验室安全操作规程
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标 准 操 作
1 、工作人员在实验时，必须使用必要的个人防护用品。
2 、禁止非工作人员进入实验室，参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入。
3 、禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。
4 、接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。
5 、以移液器吸取液体，禁止口吸。
6 、严格按照规范的实验操作，降低含有微生物或其毒素的液体溅出和气溶胶的产生。
7 、每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒。
8 、所有培养物，废弃物在运出实验室之前必须进行灭活，如高压压灭活需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。
9 、定期彻底清洁实验室场地及设备，防止鼠及虫进入实验室。
特 殊 操 作
一、尖锐器具的安全操作规程
1 、锐器包括针、注射器、玻片、加料器、毛细管、手术刀。
2 、除特殊情况（肠道外注射和静脉切开等）外，禁止在实验室使用针、注射器及其他利器，尽可能使用塑料器材代替玻璃器材。
3 、尽可能应用一次性注射器，用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，从注射器取下，禁止用手直接操作。用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中，并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。
4 、尽可能使用无针注射器和其他安全装置。
5 、禁止用手处理破碎的玻璃器具，必须用其它工具处理，如刷子、夹子或摄子，装有污染针，利器及破碎玻璃的容器，在丢弃之前必须消毒。
二、实验室消毒灭菌程序
1 、消毒方法
（ 1 ）仪器等的表面消毒：工作结束后，用 70% 乙醇溶液擦拭消毒。
（ 2 ）实验器材的分类消毒：将使用后的锐器放入防刺破、防渗漏的密闭专用锐器处置盒内， 121 。 C 高压消毒 30 分钟。其他器材放入有效氯为 2000mg/L 的含氯消毒液内浸泡 1 小时以上。处理时应避免皮肤损伤。
（ 3 ）工作台等物体表面消毒：工作完毕，用 10% （ w/v ）次氯酸钠（含 10 ， 000ppm 有效氯）或 70% 乙醇溶液擦拭消毒。
（ 4 ）个人防护用品消毒：实验结束，将隔离衣、口罩、帽子、手套、鞋套等放入包装袋内扎紧袋口进行 121 。 C 高压灭菌 30 分钟。防护镜浸泡 10% （ w/v ）次氯酸钠或 70% 乙醇或作用 30-60 分钟，用洁净水反复冲洗后包装。
（ 5 ）手的消毒：用含有效碘为 3000-5000mg/L 的消毒液或 70% 乙醇溶液擦拭，作用 1~3 分钟。
（ 6 ）空气消毒：每次实验前后用紫外灯照射消毒，每次不少于 1 小时。距紫外灯 1m 处照射强度 ≥70μW/cm2 。终末消毒采用 18ml/m3 福尔马林（ 40% 甲醛， w/v ）， 30-40 。 C 密闭熏蒸消毒 6 小时。
（ 7 ）纸张消毒：尽可能使用传真机、电脑打印等方式将信息传至清洁区。否则，应用 18 ml/m3 福尔马林， 30-40 。 C 密闭熏蒸消毒 6 小时后方可带出。
（ 8 ）地面消毒：工作结束，应用含有效氯 2000mg/L 的消毒液喷洒拖地。
（ 9 ）废弃物和一次性用品的处理：实验的废弃物和一次性用品应放入适当的容器内，就地 121 。 C 高压消毒 30 分钟，消毒后的废弃物集中焚烧处理。
2 、实验室高压消毒安全操作技术程序
（ 1 ）高压灭菌的使用
a) 使用前应了解并掌握高压灭菌器的原理及操作规则，以及不正确使用导致灾难性后果，保障消毒灭菌的质量，使用人员需经过有关培训。
b) 所有具有传染性的废物都应该高压灭菌。
c) 开始灭菌前所有物品必须贴有灭菌指示带，废物灭菌后可以看到灭菌是否完全。
d) 高压灭菌操作人员在使用高压灭菌器时不得离开岗位，高压灭菌器应按照规定进行安全和计量检定，检定合格方可投入使用，并应注意日常维护保养。
e) 高压灭菌器内的物品不得放的过满，否则影响灭菌效果。放好被消毒灭菌的物质后，高压高压灭菌器的盖子或门尽量拧紧。
f) 实验室高压灭菌器由三级生物安全防护实验室管理员定期检查，以确保高压灭菌器正常工作，防止意外事故发生，保证消毒灭菌效果。
（ 2 ）高压灭菌安全操作技术步骤
a) 在主实验室将已经准备好的所有待灭菌的废物装入不同大小的塑料袋中或不锈钢筒中，在暂时储存和灭菌时，所有废物必须放在这些袋内并放入一个灭菌盘中。在灭菌前将双层的高压灭菌袋包好，废物在灭菌袋中的体积不得超过袋子体积的 3/4 ，灭菌袋用橡皮带捆好，但不能扎得太死，否则蒸汽不能进入塑料袋内影响灭菌效果。橙色一次性废物容器放在上述的双层灭菌袋中，在储存和灭菌期间必须保持安全放置，不锈钢废物容器必须牢牢地盖紧并安全地放入灭菌的盘内，每个袋子必须贴上灭菌指示带以评价灭菌效果。
b) 实验操作间产生的所有废物应该及时就地灭菌处理。如果灭菌器正在使用或由于其它原因不能马上使用，则废物必须放在灭菌盘内、灭菌袋内捆好并放在实验操作间内，在存放期间确保袋子无损坏。
c) 当高压锅消毒灭菌到时间后，在生物安全实验室的外部打开高压锅，取出物品放在废物收集处。
d) 当开始灭菌时必须确信灭菌锅内的水量合适，高压温度和时间设置正确。
3 、衣物等废物的高压消毒灭菌
衣物等个人防护用品可以使用高压消毒柜进行高压灭菌，可根据生物安全要求和防护衣物应脱掉的地点，指定放入专门消毒室内，置入不同的高压消毒柜进行高压消毒。
三、实验室废弃物的处理
1 、实验过程中产生的污染性液体物质，废弃的液体标本，各种培养物，血液等应小心放在盛有消毒液的严格防渗漏的专用容器中，并及时加盖。
2 、实验过程中所必须使用的利器，如一次性注射器，手术刀片、针头，必须放防刺穿专用的坚壁容器，加盖密封。
（ 3 ）实验过程中所有的需废弃的，一次性吸头、吸管、离心管、平皿、个人防护用品和其它实验材料等放入防漏耐高压的袋内，扎口封平。
（ 4 ）以上废弃物必须有专人尽责，避免穿戴过满并就地高压消毒，确保 121 。 C 30 分钟。
（ 5 ）高压消毒后，集中放在废物收集处，并由专人焚烧处理。
实验室安全事故和意外处理规程
1 、病原体污染
① 皮肤污染：污染部位用清水或肥皂水冲洗，并选用适当消毒剂浸泡，如 75% 酒精浸泡时间视污染的病原体，参照消毒剂说明进行。
② 粘膜暴露：应立即用生理盐水冲洗干净，口服抗生素。
③ 损伤：包括皮肤破损、刺伤、切割伤，只要情况允许，应首先反复轻轻挤压伤口，尽可能挤出损伤处的血液，然后用大量清水清洗伤口，并用消毒液（对伤口无刺激或刺激小的，如 75% 酒精， 0.5% 碘伏）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口，视情况可采取停止工作医学观察或到正规医疗机构。
④ 眼睛溅入液体：立即到洗眼台，用生理盐水冲洗，避免揉擦眼睛，连续冲洗至少 10 分钟。
⑤ 衣服污染：
a. 尽快脱掉隔离服以防止接触其他地方和皮肤，脱掉防护手套，洗手并更换隔离服和手套。
b. 将污染的隔离服及手套放入指定的消毒袋，封好立即消毒处理。
c. 对污染处消毒。
⑥ 发生污染物的泼溅。
a. 发生在生物安全柜内
少量感染物溢出，产生有限气溶胶，应立即喷洒适当的消毒剂，并用经相同消毒液浸泡的消毒巾覆盖污染区域，离开实验室， 15 分钟后，用可行的方法移走吸水物质放入消毒袋，用新的消毒巾擦拭污染区域，并对污染的器材进行消毒处理。
发生大的污染（如滴洒大量培养物，离心管破裂，盛物的器具破碎造成的污染等）可能产生气溶胶时，迅速打开紫外灯，离开实验室。 1 小时后回到实验室用浸透消毒液的消毒巾覆盖污染区域，待 30 分钟后按前述步骤消除污染。
b. 发生在生物安全柜外
小污染，产生有限气溶胶，如落下一些固体的培养基，立即用消毒液浸湿的纸巾覆盖污染区，打开紫外灯，离开实验室。实验室门口贴上标志，向主管负责人报告。 2 小时后必须戴装有 HEPA 过滤器的动力空气净化装置的头盔，穿上防护服进入实验室，用浸湿消毒液的纸巾覆盖污染区域及周围，离开实验室。 1 小时后，再进入实验室按前述步骤清除污染，所有污染的材料放入灭菌袋高压消毒。
大污染，产生大量气溶胶，应立即停止实验，贴上明显标志，封上实验室的门，报告主管负责人， 4 小时内不准任何人进入实验室， 4 小时后戴装有 HEPA 过滤器的动力空气净化装置的头盔，穿上防护服再进入实验室，用福尔马林消毒实验室，具体操作：用电炉加热福尔马林，使福尔马林蒸汽在室内至少保持 4 小时以上，最好过夜。然后通入空气至实验室空气中检测不到福尔马林，擦去污染区域的残渣，详细记录事故经过和处理措施。
二、仪器设备故障
① 实验过程中，如发现生物安全柜或其他防护设备的技术指标偏离正常范围，不符合实验要求，应立即停止实验。报告实验室主任，并做好详细记录。
② 如发生停电，立即停止实验，按操作规程离开实验室，封好实验室门，电力恢复后，至少等 30 分钟才能再次进入实验室工作。
③ 如发生仪器故障，及时报告负责人，并报有关部门维修。仪器运出前应彻底消毒。用消毒剂彻底消毒内表面及外表面。维修人员进入需按要求穿戴防护用品，维修结束，所用工具严格消毒后带出实验室。实验室人员必须帮助和监控维修过程。
④ 事故发生后，为及时掌握实验室内的情况，有关人员可利用生物安全实验室外的监控系统帮助处理。
P2 实验室准入制度
1 、实验室工作人员、研究生、外来合作者、进修和学习人员在进入生物安全及其岗位之前，必须经过生物安全实验室主任的批准。
2 、需进生物安全实验室的人员在进实验室之前，必须认真阅读生物安全手册，接受适当的培训。
3 、对将开展研究工作的病源体作危险性评估并制定实验操作规程。
4 、实验人员应接受必要的免疫接种检测，并定期检查，禁止免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员进入实验室。
5 、根据病源体，必要时收集实验室工作人员的本底血清样本并保存，以后视情况定期收集血清标本并检测。
6 、实验人员进入实验室前，应按照有关规定正确穿戴个人防护用品。工作完毕必须按顺序脱下个人防护用品，就地消毒，不得穿工作服离开实验室。
7 、实验室工作人员进入实验室，需填写《二级生物安全防护实验室使用登记表》，记录进入实验室的时间、工作内容、离开时间，并填写实验过程是否有异常情况。
8 、禁止将无关的动植物带入实验室。
实 验 室 须 知
1 、非实验室有关人员和物品不得进入实验室；
2 、在实验室内不得进食和饮水，或者进行其他与实验室无关的活动；
3 、工作人员在实验时应穿工作服，必要时加用其他个人防护用品。
4 、严格按照操作规程使用各种仪器和设备，并及时给予必要的日常保养；
5 、每时工作结束离开实验室之前，要关实验室的水电窗，并检查没有使用的仪器是否已拔掉电源插头；
6 、绝对禁止在实验区域内用火焰法处理受污染的器械，工作台面及地面。
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